菌種保藏的方法很多，對于食藥用菌，液氮保 藏是一種公認(rèn)的、長久有效的保藏方法，然 而陳燕妍在對擔(dān)子菌菌種 24 屬 43 種 122 株進(jìn)行液 氮保藏時(shí)發(fā)現(xiàn)，靈芝屬的菌株有較明顯的失活， 顧金剛也指出，菌種進(jìn)行液氮保藏需要對其進(jìn)行優(yōu) 化才能得到較好的保藏效果。鑒于此，本文以 靈芝菌種為材料，對影響液氮保藏效果的降溫速 率、保護(hù)劑濃度、解凍溫度、培養(yǎng)基質(zhì)和菌餅大小 等方面進(jìn)行系統(tǒng)研究，以期掌握靈芝菌種的液氮保 藏技術(shù)，使之在靈芝種質(zhì)資源的保藏中得到更好地 應(yīng)用。恒溫培養(yǎng)箱 ( SHP-250 型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備 有限公司) ，超凈工作臺 ( SW-CJ-2FD 型，上海博 迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠) ，手提式高壓蒸汽滅 菌鍋 ( YXQ-LS18SI 型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī) 療設(shè)備廠) ，Cryo GenesisTMV5 程序降溫儀 ( 廣州 倍瑪特儀器設(shè)備有限公司) ，恒溫水浴鍋 ( HH-USA，上海赫田科學(xué)儀器有限公司) ，液氮罐 ( YDS30，山東博科科學(xué)儀器有限公司)。

    在液氮保藏中涉及多種因素，因此，找到最優(yōu) 的工藝是進(jìn)行液氮保藏的核心。以往降溫處理過程 中，真菌一般常用的程序是以每分鐘 1 ℃ 降溫至 －30～ －40 ℃，然后迅速放入液氮中。本文對 靈芝菌種的降溫程序進(jìn)行優(yōu)化時(shí)也發(fā)現(xiàn)，在 4 ～ －40 ℃時(shí)，以每分鐘 1 ℃速率進(jìn)行降溫，菌種的活 力最高，但在常溫降至 4 ℃，卻是以每分鐘 4 ℃或 9 ℃的效果最好。而劉新銳等 在采用相同降溫 程序?qū)ο愎骄N進(jìn)行液氮保藏時(shí)，復(fù)蘇后的菌種生 長速度無差異，這可能是不同種類食藥用菌本身的 特性差異引起的。